Полимеразна верижна реакция (ПВР)

Предимства на ПВР-анализа

Основно предимство на ПВР-анализа е високата чувствителност, като има разлика между аналитична и диагностична активност.

• Аналитична чувствителност е това минимално количество от копия на ДНК или РНК в един милилитър от разтвора-образец, което може да бъде определено с дадената тестсистема.
• Диагностичната чувствителност се оценява в проценти и определя броя пациенти с даденото заболяване, даващи наистина положителни резултати при използване на конкретния набор.

Чувствителността се определя като съчетание на три фактора: ефективност при определянето на ДНК-причинителя, чувствителността на ПВР въобще и чувствителността на избрания за индикация метод.

Друго предимство е диагностичната специфичност на ПВР-тестсистемите, която се определя от процента на здравите хора, които наистина имат отрицателни резултати от анализа; тя също е много висока. За ПВР-наборите тя се оценява на 99 – 100%. Възможностите, заложени в ПВР-анализа, позволяват да се достигне ненадмината диагностична специфичност, което се доказва от отсъствието на кръстосани реакции със сходни микроорганизми или други агенти.

Специфичност на диагностикума – това е способността да се улавят определени причинители на инфекции на фона на всякакви други микроорганизми, вируси и клетки на организма-хазяин. От тази гледна точка възможностите на ПВР са уникални.

Диагностичната чувствителност и специфичност на ПВР са съпоставими, а често и превъзхождат наречените „златен стандарт“ за диагностика на инфекциозни заболявания културални методи. Изследвания във водещи световни лаборатории са доказали, че посредством ПВР се откриват с 10% повече положителни проби например за Хламидия трахоматис, отколкото чрез културални или други методи. Като се вземе под внимание и продължителността на култивирането (от няколко дни и седмици до месеци), то преимуществата на ПВР-метода стават несъмнени. Получаването на резултатите от ПВР става за един работен ден. Проведена е класация по чувствителност в световен мащаб на различни методи за диагностика:

1. PCR – 90 – 100%
2. Културални изследвания – 60 – 80%
3. Пряка имунофлуоресценция – 55 – 75%
4. ELISA – 50 – 70%
5. Експресни тестове – 40 – 60%

Като се сумират преимуществата на метода в диагностиката на инфекциозните заболявания, може да се каже:

• позволява да се откриват патогенните за човека бактерии и вируси в случаи, когато това не е възможно по друг начин;
• за диагностика може да се използва само един набор от прибори и реактиви, които незначително се различават един от друг, което е обусловено от химическото сходство на нуклеиновите киселини;
• отпада необходимостта от специфични хранителни среди, клетъчни култури;
• възможно е поставянето на диагнозата при серонегативни пациенти в най-ранни стадии от развитието на инфекциозния процес;
• лесно се определят причинители, за които не са разработени или са много трудни за изпълнение методите на култивиране;
• методът позволява да се постави диагноза в течение на работния ден;
• има висока чувствителност и специфичност – до 1 – 5 причинителя в проба;
• анализът се извършва в минимално количество проба;
• възможна е едновременна диагностика на няколко микроорганизма в една проба.

Чрез ПВР може да се изследват различни биологични образци: цитонамазки, кръвни проби, серум, левкоцити, урина, сълзи, ликвор, лаваж, мляко. Например за диагностика на полово предаваните заболявания (Хламидия трахоматис, Микоплазма, Уреаплазма и др.) като правило се прави цитонамазка от епителни клетки от цервикален канал или уретра, може да се използва слюнка, урина.